Mutacje COL4A1 i dziedziczna angiopatia, nefropatia, tętniaki i skurcze mięśni ad

Opisujemy mutacje COL4A1 u osób z trzech rodzin z wrodzoną angiopatią z nefropatią, tętniakami i skurczami mięśni, które nazywamy zespołem HANAC. Nefropatia składała się z przetrwałego krwiomoczu lub obustronnych dużych cyst. Angiopatia atakuje zarówno małe naczynia, jak i duże tętnice i powoduje leukoencefalopatię, krętość tętniczek siatkówki oraz tętniaki wewnątrzczaszkowe. Wszystkie trzy mutacje COL4A1, zlokalizowane w eksonach 24 i 25, wpływają na reszty glicyny, przerywając powtórzenie aminokwasu Gly-Xaa-Yaa. Metody
Ocena kliniczna
Pisemną świadomą zgodę uzyskano od wszystkich podmiotów lub ich rodziców. Badania fenotypowe obejmowały ocenę kliniczną, analizę moczu, pomiar stężenia kreatyniny w surowicy i wydalanie białka z moczem, ocenę szybkości filtracji kłębuszkowej z użyciem czterowzmiennej modyfikacji diety w równaniu choroby nerek, 8 tomografię ultradźwiękową jamy brzusznej, tomografię komputerową jamy brzusznej (CT ) lub obrazowanie rezonansu magnetycznego nerki (MRI), badanie mięśni i pomiar poziomów kinazy kreatynowej w surowicy, badanie dna oka i angiografia fluoresceinowa, badanie MRI mózgu i angiografia rezonansu magnetycznego lub angiografia CT.
Analiza sprzężeń genetycznych
Genomowy DNA ekstrahowano zgodnie ze standardowymi metodami. Do analiz haplotypów wykorzystano polimorficzne markery mikrosatelitarne – D13S173, D13S126, D13S1315 i D13S261 – które obejmują odstęp genetyczny locus COL4A1-COL4A2 w 13q34.
Wykrywanie mutacji
Pierwotne fibroblasty hodowano z próbek pobranych z biopsji skóry. Całkowity RNA wyizolowano z hodowanych fibroblastów za pomocą RNAwiz (Ambion). Komplementarny DNA (cDNA) zsyntetyzowano za pomocą systemu syntezy pierwszej nici Superscript do testu odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej polimerazy (Invitrogen). Pełnej długości cDNA COL4A1 amplifikowano za pomocą 11 par starterów i obie nici sekwencjonowano. Członkowie rodziny i 150 etnicznie dobranych kontroli przeszukiwano pod kątem mutacji za pomocą specyficznych starterów amplifikujących ekson 24 COL4A1 lub eksonu 25. (Sekwencje wszystkich starterów są wymienione w Dodatkowym dodatku, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm .org.)
Mikroskopia elektronowa i mikroskopia elektronowa immunoglobulin
Wykonywano mikroskopię elektronową, jak opisano uprzednio9. Immunogolową mikroskopię elektronową wykonywano na ultracienkich zamrożonych odcinkach próbek z biopsji nerki, jak opisano wcześniej. 10 wycinków poddano obróbce w celu pośredniego znakowania immunogoldingowego przy użyciu króliczych przeciwciał przeciwko ludzkiemu. (IV) i. 2 (IV). przeciwciała (rozcieńczenie, 1: 120) (Novotec).
Wyniki
Ocena fenotypowa
Rysunek 1. Rycina 1. Charakterystyka fenotypowa pacjentów z dziedziczną angiopatią z zespołem nefropatii, tętniaków i skurczów mięśni (HANAC). Próbki tkanki nerkowej z Podmiotu IV-1, Rodzina 1, były normalne pod mikroskopem świetlnym (panel A, górny, barwnik Massona), ale mikroskop elektronowy (panel A, spód) wykazywał wyraźne pogrubienie rurowej błony podstawnej, z elektronowym połyskiem obszary związane z zaburzeniami ogniskowymi śródmiąższowej kapilarnej błony podstawnej (strzałki)
[patrz też: powidon, alantavit, lipancrea 16000 ]